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細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発
https://doi.org/10.24517/00060174
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名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
---|---|---|
ME-PR-WATANABE-T-kaken 2018-2p.pdf (147.5 kB)
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Item type | 報告書 / Research Paper(1) | |||||
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公開日 | 2021-04-09 | |||||
タイトル | ||||||
タイトル | 細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発 | |||||
言語 | ||||||
言語 | jpn | |||||
資源タイプ | ||||||
資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_18ws | |||||
資源タイプ | research report | |||||
ID登録 | ||||||
ID登録 | 10.24517/00060174 | |||||
ID登録タイプ | JaLC | |||||
著者 |
渡邉, 琢夫
× 渡邉, 琢夫 |
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著者別表示 |
Watanabe, Takuo
× Watanabe, Takuo |
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提供者所属 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 金沢大学医薬保健研究域医学系 | |||||
書誌情報 |
平成18(2006)年度 科学研究費補助金 特定領域研究 研究実績の概要 en : 2006 Research Project Summary 巻 2006, p. 2p., 発行日 2018-03-28 |
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抄録 | ||||||
内容記述タイプ | Abstract | |||||
内容記述 | 1.細胞表面受容体のオリゴマー化モニタリング系の開発 細胞膜受容体であるRAGE (receptor for advanced glycation endproducts)をモデルとし、2分子FRET法により受容体オリゴマー化をモニタリングする技術を確立した。これにより、受容体の蛍光タンパク融合組換え体を作製することなくFRETでオリゴマー化をモニタリングすることが可能となった。 (1)RAGE細胞外ドメインに結合し、かつRAGEとリガンドとの結合を阻害しないモノクローナル抗体を作製し、FRETのドナーとアクセプターの対をなす2種の蛍光色素で標識した。 (2)RAGE過剰発現細胞株の培養液中に上記の2種の蛍光標識抗体を加え、生細胞表面のRAGEを蛍光標識し、RAGEのオリゴマー化をFRETシグナルの変化を測定することによりモニタリングした。 (3)その結果、リガンド刺激後20分をピークとするFRETシグナルの上昇が検出され、本技術の有効性が示された。 2.1分子FRET法による細胞内シグナルモニタリングと受容体発現量の相関関係の解析 細胞内シグナル強度のモニタリングと、受容体の発現量解析を同時に行うことにより、受容体発現量とシグナル強度の相関解析が可能な系を開発した。 (1)NFκBの活性化によりβ-ラクタマーゼを発現するレポーター遺伝子を組み込んだ細胞株に、RAGE発現ベクターを導入した。 (2)上記細胞にβ-ラクタマーゼによる分解で分子内FRETが消失する蛍光色素分子を取り込ませ、FRETシグナルによりNFκB活性化を検出すると同時に、蛍光抗体でRAGEを標識し発現量を測定した。 (3)その結果、RAGE発現量が中程度の細胞において最も強くNFκBが活性化されており、発現量が過剰な細胞ではむしろ活性化の程度が低いことが明らかとなった。 |
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内容記述 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 研究課題/領域番号:18038017, 研究期間(年度):2006 | |||||
内容記述 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 出典:「細胞膜受容体の分子挙動と細胞応答の統合的測定技術の開発」研究成果報告書 課題番号18038017 (KAKEN:科学研究費助成事業データベース(国立情報学研究所)) (https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-18038017/)を加工して作成 |
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著者版フラグ | ||||||
出版タイプ | AM | |||||
出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa | |||||
関連URI | ||||||
識別子タイプ | URI | |||||
関連識別子 | https://nrid.nii.ac.jp/ja/search/?kw=40303268 | |||||
関連名称 | https://nrid.nii.ac.jp/ja/search/?kw=40303268 | |||||
関連URI | ||||||
識別子タイプ | URI | |||||
関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-18038017/ | |||||
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