@techreport{oai:kanazawa-u.repo.nii.ac.jp:00042615,
 author = {並木, 幹夫 and Namiki, Mikio},
 month = {Mar},
 note = {1)Azoospermy factor gene (AZF) のcloning
男性不妊症患者のDNA分析により発見したY染色体長腕上に存在する精子形成関連遺伝子AZFのcliningを行うため、無精子症患者または乏精子症患者のY染色体欠失地図を作成し、AZFが存在する座位の欠失区間を同定した。さらに、AZFが含まれるYACを特定し、YACから作成したcosmid libraryを用いて、cosmid contigを作成した。さらにこれをrestriction cutし、plasmidにsubcloningた。現在、無精子症患者父子の微妙な欠失の違いからAZFを、約30kbの範囲内にしぼりこんだ。また、Exon tapping法によっても、AZFのcloningを同時進行で行っている。
2)ヒト精細胞分化誘導遺伝子のcloning
マウス精細胞を特異的に認識する種々の抗体を作成し、この抗体をプローブとしてマウス精巣cDNA libraryより19 cloneを単離した。このうち、mouse SCP-1をプローブとしてヒト精巣cDNA libraryよりhuman SCP-1 をcloningした。human SCP-1は精細胞の減数分裂前期に出現し、正常な分裂に必要な構造体であるsynaptonemal complexの一部を構成する蛋白をコードし、精細胞の分化に重要な役割を有していると考えられた。
3)精細胞培養系の確立
上記遺伝子のcloningをふまえ、上記遺伝子導入実験の予備実験として、ラット精細胞をin vitroで一定期間培養することに成功した。, 1) Cloning of Azoospermy factor gene (AZF)
For molecular cloning of AZF which is the candidate gene related human spermatogenesis located on the long arm of Y chromosome we made a deletion map of the long arm of Y chromosome from the results of the DNA analysis of male infertile patients with azoospermia or severe oligozoospermia and identified a specific location in which AZF should be included. Then, we found YAC in which AZF should be included and subcloned the cosmid contig mede from the YAC to a plasmid vector. AZF is now included within 30 Kb DNA.Another method using Exon trapping for the cloning of AZF is also on going.
2) Cloning of genes which induce differentiation of human testis germ cells
For molecular cloning of genes which induce differentiation of human testis germ cells we screened human testis cDNA library using mouse cDNAs as probes. We isolated human SCP-1 which appears in the phase before the miosis and determined sequences of the DNA and the protein.
3) Establishment of in vitro culture of human germ cells
We established in vitro culture system of human germ cells which has been very difficult. Using this system we will be able to do experiments in vitro differentiation human germ cells., 研究課題/領域番号:07457372, 研究期間(年度):1995-1996, 研究機関: 金沢大学医学部, 出典：「ヒト精子形成機構およびヒト精子形成障害の病態解明のための分子生物学的研究」研究成果報告書　課題番号07457372
  (KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）)
　　　本文データは著者版報告書より作成, 70155985, 07457372},
 title = {ヒト精子形成機構およびヒト精子形成障害の病態解明のための分子生物学的研究},
 year = {1997}
}