@techreport{oai:kanazawa-u.repo.nii.ac.jp:00057595, month = {Sep}, note = {本研究は、ラットの子宮の腺細胞で骨硬化ホルモンであるカルシトニンが発現しているという米国の研究者の報告に刺激され、試みにキンギョの精巣・卵巣をホモジェナイズしてRT-PCR法でカルシトニンcDNAが増幅されるか否かを行った所、まさしくそれが増幅され、さらにキンギョの精巣でカルシトニン免疫陽性神経線維が見っかつた所から始まった。従って、魚の生殖巣の神経がカルシトニンを発現させていると考えられた。そこで遺伝的に性が解明されるティラピア用いて生殖巣へ軸索を伸ばしている神経節に免疫染色を行ない、神経軸索が、例えば生殖巣の筋肉にアクセスしているのか、あるいはステロイド産生細胞へアクセスしているのか、神経節を切除したらどうなるか等を見るべく計画した。しかしながら、ティラピアの神経節に免疫陽性反応はなく、しかも神経節は分節していることがあり、全摘出は困難であることもわかった。従って、当初の計画は頓挫してしまった。しかしながら、生殖巣内のカルシトニンの発現にこだわり、新たなる試みとして、サケの未受精卵をホモジェナイズしてRT-PCR法によるカルシトニンcDNAの増幅を試みると、明らかに鰓後腺がつくるタイプと同じカルシトニンcDNAが増幅された。従って、残りの時間を全力を挙げて卵の中でカルシトニンmRNAがどこにあるのか、発生に伴ってどうなるのかを調べた。その結果、卵の動物極側に多く存在すること、卵膜にも卵黄にも存在し、発生中も検出できることがわかった。ペプチドホルモンのmRNAが未受精卵にすでに含まれているという発見は脊椎動物では初めてであり、日本動物学会第70回大会にて報告した(Zool. Sci.,17,suppl.6p)。結局、タイトルと研究内容が異なる結果となり、今回は教訓となったが、卵内のカルシトニンmRNAの発見は脊椎動物全体に関わる重要なことかもしれず、今後も研究を続けて行きたいと考えている。, Researchers in US found the calcitonin (CT) mRNA in the uterus of rats, and supposed that CT may make a suitable environment of Ca for cellular adhesions and differentiation of organs in eiobryos. We were stimulated by their report, and tried to amplify the CT cDNA in the testes and ovaries of goldfish by RT-PCR method. As a result, the same sequence of the nucleotides as the ultimobranchial calcitonin was amplified from homogenates of those gonads. Furthermore, we found CT-immurioreactive axons of neurons in the testis of goldfish. Therefore, we planed to examine the access points of the axons of the CT-producing neurons, using tilapia, because those axons may be terminated at muscles or steroid-producing cells in the gonads. In addition, we were going to ablate the neural ganglion in the gonads, and to observe the effects. In tilapia, however, the neural ganglion was not immunoreacted against the anti-CT antiserum, and was not compact but dispersed. Therefore, this project was judged to be impossible to do, although we are regretted very much. However, we stuck at the expression of CT in gonads, and examined the presence of CT mRNA in salmon eggs. As a result, we could amplify CT cDNA by RT-PCR method in the egg membrane just ovulated and on the way,of embryo-developing. The amplification rate was larger in the animal pole side than that in the vegetal pole side. Furthermore, CT cDNA could be amplified from yolk as well. The pattern was similar to that in the egg membrane. Although we amplified the elongation factor as the control, the results were similar. Therefore, we could not conclude that distribution pattern of the CT mRNA is specific or not. In the egg membrane just after hatching out of fry, CT cDNAwere amplified as well. We made oral presentation about this result at 71 annual meeting of Zoological Society of Japan in Yamagata, 2000 (Zool. Sci., 17 suppl. 6p). As this result must be the first finding, we will continue to make a research about this phenomenon., 研究課題/領域番号:11640662, 研究期間(年度):1999 – 2001, 出典:「魚類の生殖巣に見い出されたカルシトニンmRNAの生理的意味の解明」研究成果報告書 課題番号11640662 (KAKEN:科学研究費助成事業データベース(国立情報学研究所)) (https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-11640662/116406622001kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作成, 金沢大学理学部}, title = {魚類の生殖巣に見い出されたカルシトニンmRNAの生理的意味の解明}, year = {2003} }