@techreport{oai:kanazawa-u.repo.nii.ac.jp:00057642,
 month = {Mar},
 note = {今回の研究で以下の2点を明らかにした。1,細胞外マトリックス分解酵素であるMMP(matrix metalloproteinase)及びそれらの抑制因子であるTIMP(tissue inhibitors of metalloproteinases)-1,2の浸潤,髄腔内播種における役割を考察した。手術材料を用い上記分子の産生量,局在を検討し,更に神経膠芽腫細胞株に遺伝子導入し浸潤能への関与を検討した。その結果,悪性神経膠腫の浸潤にはMMP-2と細胞膜貫通型MMP(MT1-MMP)が関与しており,MT1-MMPとTIMP-2の不均衡が神経膠芽腫の髄腔内播種に重要であると考えられた。2,神経膠腫の悪性度が高くなるにつれ,高発現する転写因子Ets-1に着目した。神経膠腫細胞株に,DNA結合能力を有するが転写活性化部位を欠くEtsドミナントネガティブ変異体を遺伝子導入した細胞株を樹立した(U251-DN)。これはurokinase type plasminogen activatorの発現低下をきたし細胞浸潤の低下が起こることを見出しEts-1を主要な浸潤関連転写因子と位置づけた。更に細胞外基質への接着,運動能を検討したところ,ファイブロネクチン上での接着能低下,細胞骨格低形成,細胞移動能低下,focal adhesion kinaseリン酸化低下が示された。そこで接着分子の発現を検討したところ,U251-DNにおいてインテグリンα5およびβ3の発現低下が見いだされた。さらに手術材料を用い,上記分子のmRNA発現量を定量的RT-PCR法により計測した。その結果,インテグリンα5,β3とEts-1の発現量が正の相関関係を示し,神経膠芽腫において両者の高発現が認められた。このことからEts-1が細胞外マトリックス分解酵素のみならず,接着因子の発現調節を担い,神経膠腫の脳実質への浸潤に大きく関与していることが明らかにされた。, We revealed two points as follows. 1)Among proteinases, matrix metalloproteinases(MMPs)are thought to play a key role in the tumor progression through the degradation of extracellular matrix. We examined th role of MMP-2(gelatinase A)and membrane type 1-MMP(MT1-MMP, an activator of the zymogen of MMP-2=proMMP-2)together with their inhibitors, tissue inhibitors of metalloproteinases(TIMP-1 and TIMP-2), in the invasion of human astrocytic tumors. The investigations were performed using sandwich enzyme immunoassay systems, quantitative reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR), gymography, Immunohistochemistry and cell transfection. The results suggest that MT1-MMP may contribute to the invasion and CSF dissemination of glioblastoma cells on the basis of an imbalance to TIMP-2. 2)Ets transcription factors are associated with tumor malignancy. We analyzed effects of Ets-DN-expression on cell adhesion, migration and phosphorylation of focal adhesion kinase(FAK). U251 cells expressing Ets-DN(U251-DN)showed reduced cell adhesion, spreading and extension of actin stress fibers on dishes coated with fibronectin but not on dishes coated with collagen. Phosphorylation levels of FAK in U251-DN cells were also attenuated on dishes coated with fibronectin. Reduced expression level of integrin α5 subunit in U251-DN cells was demonstrated by semi-quantitative RT-PCR analysis. Furthermore, down-regulation of transcription from the integrin α5 promoter by expression of Ets-DN was shown by luciferase reporter assay. Semi-quantitative RT-PCR of surgical samples of brain tumors revealed that the expression level of Ets-1 mRNA correlated with that of integrin α5 mRNA in glioma. These results suggest that Ets-1 contributes to glioma malignancy by upregulating expression of the integrin α5 subunit, which composes integrin α5β1, mediates intracellular signaling and the subsequent acceleration of the invasive process including cell adhesion and migration., 研究課題/領域番号:11470286, 研究期間(年度):1999 – 2000, 出典：「神経膠芽腫の浸潤関連遺伝子の解析」研究成果報告書　課題番号11470286
（KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所））
（https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-11470286/114702862000kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作成, 金沢大学医学部},
 title = {神経膠芽腫の浸潤関連遺伝子の解析},
 year = {2002}
}