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Clostridium difficileトキシンAの構造と機能の解折
https://doi.org/10.24517/00067198
https://doi.org/10.24517/00067198415e51a7-a77b-4434-9ade-0c77661065aa
| 名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
|---|---|---|
ME-PR-NAKAMURA-S-kaken 1993-2p.pdf (97.5 kB)
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.png)
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| Item type | 報告書 / Research Paper(1) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 公開日 | 2022-10-21 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | Clostridium difficileトキシンAの構造と機能の解折 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | Structure and Function of Clostridium Difficile Toxin A | |||||
| 言語 | en | |||||
| 言語 | ||||||
| 言語 | jpn | |||||
| 資源タイプ | ||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_18ws | |||||
| 資源タイプ | research report | |||||
| ID登録 | ||||||
| ID登録 | 10.24517/00067198 | |||||
| ID登録タイプ | JaLC | |||||
| 著者 |
中村, 信一
× 中村, 信一 |
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| 提供者所属 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 金沢大学医学部 | |||||
| 書誌情報 |
平成2(1990)年度 科学研究費補助金 一般研究(C) 研究成果報告書概要 en : 1990 Fiscal Year Final Research Report Summary 巻 1989 – 1990, p. 2p., 発行日 1993-08-11 |
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| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | 高度精製Clostridium difficileトキシンAをサイログロブリンアフィニティクロマトグラフィ-に2種の陰イオン交換カラムクロマトグラフィ-(QSepharose FF,Mono Q)を併用することにより得ることができた。最終標品は未変性PAGE上分子量520〜540KDaの単一バンドとして泳動された。本精製毒素は非還元下でのSDSーPAGEの結果、分子量240KDaの主バンド、分子量38〜345KDaの10種のマイナ-バンド及び分子量46〜440KDaの27種のフェイントバンドとして泳動され、またBーメルカプトエタノ-ルを添加し還元下でSDSーPAGEを行うと分子量240KDaのバンド、38〜345KDaの4種のマイナ-バンド及び分子量46〜440KDaの31種フェイントバンドとして泳動された。2次元電気泳動の結果、非還元下で検出された分子量255〜345KDaの7種のマイナ-バンドは還元後240KDaの主バンドに変化した。これらの結果はトキシンAは240KDaよりも小さな分子量をもつサブユニットから構成されている可能性を示唆する。精製トキシンAに対するモノクロ-ナル抗体(MAb)の作製を試みた結果、9種類(2E15、3B4、37B5、45A3、46Ab、49c4、61B5、112Gb)のMAbが得られた。MAbのアイソタイプは、37B5がIgG2b、Kであり、他は全てIgM、Kであった。37B5のELSA価は10^5で最も高く、次いで2E15、3B4、23C5、46A6では10^4で、他は10^3であった。トキシンAの未変性PAGE後のイムノブロッテイングでは112G6以外の8種のMAbは全て540KDaのトキシンAがバンドと反応したが、特に37B5が強く反応した。SDSーPAGE後のイムノブロッティングでは、2E15、3B4、37B5、49C4のみが240KDaのバンドと反応した。トキシンAのル-プ活性、マウス致死活性、細胞毒性、赤血球凝集活性に対する中和能を検討した結果37B5はル-プ活性を中和したが、他のMAbはいかなる生物活性も中和しなかっった。以上の結果は赤血球凝集活性がトキシンのAのル-プ活性の発現に必須ではないことを示している。 | |||||
| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | Highly purified toxin A of Clostridium difficicle was obtained by bovine thyroglobulin affinity chromatography followed by two sequential anionーexchange chromatography steps on Q Sepharose FF and Mono Q. The mol. wt of toxin A in nonーdenaturing conditions was estimated to be 520-540 KDa by native PAGE. In contrast, with SDS-PAGE under reducing or nonーreducing conditions, a major band of 240KDa, 10 minor bands of 38-345 KDa and 27 faint bands of 46-440 KDa (nonーreduced conditions), or four minor bands of 38-345 KDa and 31 faint bands of 46-440 KDa (reduced conditions), were detected. In two-dimensional PAGE, the seven minor bands of 255-345 KDa obtained by non-reducing SDS-PAGE migrated to the 240 KDa position after reduction with betaーmercaptoethanol. These findings indicate that toxin A would be composed of subーunits of smaller than 240 KDa. Nine Monoclonal Antibodies (MAb), 2E15, 3B4, 23C5, 37B5, 45A3, 46A6, 49C4, 61B5 and 112G6, to the purified toxin A were produced. The isotype of 37B5 was IgG2b, kappa, and that of all other 8 MAbs was IgM, kappa. The highest ELISA value of the MAbs was 10^5 for 37B5, and that of other MAbs waS 10^<3-4>. Immunoblot analysis after nonーdenatured PAGE showed that 8 MAbs except for 112G6 gave positive reaction with 540 KDa band of toxin A. The immunoblot analysis after SDS-PAGE showed that 4 MAbs, 2E15, 3B4, 37B5 and 49C4, gave positive reaction with 240 KDa major band of toxin A. In neutralisation test by these MAbs for enterotoxicity, mouse lethality, haemagglutination activity and cytotoxitity, 37B5 was demonstrated to neutralise completely enterotoxicity checked by rabbit ileal loop response test but not any other biological activities, and none of other 8 MAbs showed any neutralising activities. These results suggest that haemagglutination activity would not be necessary for induction of enterotoxicity of toxin A. |
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| 内容記述 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 研究課題/領域番号:01570231, 研究期間(年度):1989 – 1990 | |||||
| 内容記述 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 出典：研究課題「Clostridium difficileトキシンAの構造と機能の解折」課題番号01570231 （KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01570231/015702311990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作成 |
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| 著者版フラグ | ||||||
| 出版タイプ | AM | |||||
| 出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=90019620 | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=90019620 | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-01570231/ | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-01570231/ | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01570231/015702311990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/ | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01570231/015702311990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/ | |||||
