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哺乳類細胞のHIヒストンリン酸化酵素の精製とその活性制御機構
https://doi.org/10.24517/00067213
https://doi.org/10.24517/0006721379272959-4502-415c-a94b-9bee16c536f2
| 名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
|---|---|---|
PH-PR-YASUDA-H-kaken 1993-2p.pdf (97.6 kB)
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.png)
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| Item type | 報告書 / Research Paper(1) | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 公開日 | 2022-10-21 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | 哺乳類細胞のHIヒストンリン酸化酵素の精製とその活性制御機構 | |||||
| タイトル | ||||||
| タイトル | The Purification of Mammlian H1 Thistone Kinase and Regulation of its Activty | |||||
| 言語 | en | |||||
| 言語 | ||||||
| 言語 | jpn | |||||
| 資源タイプ | ||||||
| 資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_18ws | |||||
| 資源タイプ | research report | |||||
| ID登録 | ||||||
| ID登録 | 10.24517/00067213 | |||||
| ID登録タイプ | JaLC | |||||
| 著者 |
安田, 秀世
× 安田, 秀世 |
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| 提供者所属 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 金沢大学薬学部 | |||||
| 書誌情報 |
平成2(1990)年度 科学研究費補助金 一般研究(C) 研究成果報告書概要 en : 1990 Fiscal Year Final Research Report Summary 巻 1989 – 1990, p. 2p., 発行日 1993-08-11 |
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| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | マウス倍養細胞FM3A細胞をもちいてH1ヒストン燐酸化酵素を、分裂期におけるH1ヒストン燐酸化部位を含む合成ペプチド(S1ペプチド)を基質に、核画分から硫安沈澱、MonoQ、ヒドロキシアパタイト、ス-パ-ロ-ス12、MonoSによって精製した。その結果、この酵素は酵母のCD2^+キナ-ゼの哺乳類型cdc2キナ-ゼと同一であることが免疫化学的手法により明らかになった。さらにこの酵素はH1ヒストンに対し非常に選択性が高く、各種ペプチド基質を用いた結果から、トレオニン(セリン)ープロリンー(アミノ酸)ーリジンの配列を認識することがわかった。H1ヒストン燐酸化酵素/cdc2キナ-ゼは細胞周期においてG2/M期で活性が上昇しこの活性の上昇は酵素の燐酸化チロシン残基の脱燐酸化を伴っているものと考えられた。しかもこのcdc2キナ-ゼのG2期での活性化、M期での不活性化いずれもフォスファタ-ゼ1、2Aの阻害剤オカダ酸によっておこることがわかり、活性化、不活性化いずれの制御機構においても蛋白質の燐酸化反応が関与しているものと考えられた。この機構の詳細については今後の研究が必要である。さらにG2/M期に高温で増殖が停止するマウス温度感受性変異株tsFT210細胞がcdc2キナ-ゼ遺伝子に点突然変異がおこりそれによりC末端部のプロリンがセリンに変化していることをが確認した。そのことから哺乳類細胞においてcdc2キナ-ゼがG2/M期に必須な酵素であることを明らかにした。 | |||||
| 抄録 | ||||||
| 内容記述タイプ | Abstract | |||||
| 内容記述 | The H1 histone kinase was purified from mouse mammary carcinoma cell line FM3A cells by use of several steps including ammonium sulfate precipitation, mono Q, hydroxylapatite, superose 12 and mono S coulumn chromatography. The-S1 peptide which contained the sequence of H1 histone phosphorylated at mitosis, was used as substrate. The purified enzyme was the same one as murine homolog to yeast CDC2^+ kinase. This was proven by immunological methods. This H1 histone/cdc2 kinase could phosphorylate specifically H1 histone and recognized Thr(Ser)-Pro-X-Lys sequence, that was proven by use of several synthetic peptides. The activity of H1 histone/cdc2 kinase was increased at G2/M phase and the activation was seemed to be regulated by the dephophorylation of the phosphorylated tyrosine residue of it. Furthermore, Okadaic acid, which was potent inhibitor of phophatase 1 and 2A, could activated the cdc2 kinase in vivo at G1/S and S phase, and it could inactivate same kinase in vivo at mitosis. This suggest that both activation and inactivation of this enzyme are requlated by the protein phosphorylation cascade. Next, it was proven that cdc2 kinase was necessary enzyme for the cells t o enter mitosis by use of temperature sensitive mutant tsFT210 cells. The tsFT210 cells could grow at 33^ﾟC but could not grow at 390C. The cells were arrested at G2/M phase at 39^ﾟC.The activity of cdc2 kinase in vitro was temperature sensitive, compared to wild type enzyme. The the cDNA of cdc2 kinase was amplified by PCR method, and sequenced. One point mutation, C to T Change, was found in this mutant at the 905th base from the initial A in ATG codon. This mutation caused a change of proline to serine in the carboxyl teminal region of this enzyme. The wild type cDNA could com pensate the temperature sensitivity of this mutant by the transfection into the mutant, it was clear that the mutant cells could not enter nitosis because of the defect of cdc2 kinase. |
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| 内容記述 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 研究課題/領域番号:01571200, 研究期間(年度):1989 – 1990 | |||||
| 内容記述 | ||||||
| 内容記述タイプ | Other | |||||
| 内容記述 | 出典：研究課題「哺乳類細胞のHIヒストンリン酸化酵素の精製とその活性制御機構」課題番号01571200 （KAKEN：科学研究費助成事業データベース（国立情報学研究所）） （https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01571200/015712001990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/）を加工して作成 |
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| 著者版フラグ | ||||||
| 出版タイプ | AM | |||||
| 出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=40111554 | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/search/?qm=40111554 | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-01571200/ | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/grant/KAKENHI-PROJECT-01571200/ | |||||
| 関連URI | ||||||
| 識別子タイプ | URI | |||||
| 関連識別子 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01571200/015712001990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/ | |||||
| 関連名称 | https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-01571200/015712001990kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/ | |||||
