@techreport{oai:kanazawa-u.repo.nii.ac.jp:00061500, month = {Mar}, note = {はじめに、変態時のエクジソンとJHの分泌量の変動を正確に知るため、それぞれの抗体をつくり、ラジオノムノアツセイにより測定した。とくにJHについては簡便な方法を開発した。翅原基中のエクジソン結合体量の成長にともなう変動を測定したところ、5令4日目、造繭直前および蛹化時にピークをもつが、作用しない5令初期にも存在することがわかり、エクジソンの作用時かそうでないかに関係なく、エクジソンによる合成誘導のないことがわかった。翅成虫原基から結合蛋白を分離・精製したところ、25KDと60KDに、強いエクジソン結合活性をもつ物質が得られた。その解離恒数は4nMレベルで、ショウジョウバエのエクジソン結合体と比較すると、分子は小さいが、結合力はほとんど同じことがわかった。 カイコのレクチン様蛋白は、ほぼ体液中のエクジソンと同様に変動し、蛹化前にはエクジソンにその合成が誘導されることがわかった。その蛋白の精製と特性解析は、温度処理、酵素処理、SDS電気泳動、抗体作製などにより進められた。高温による不活化や、トリプシン処理による不活化はカイコレクチンがタンパクであることを示している。アフィニティクロマトグラフは、糖処理による不活化が、グルクロン酸ガラクツーロン酸、アンノース、ブドー糖、果糖の順に好くなることから、グルクロン酸をリガンドとした。アフィニティークロマトで分離したタンパクは、88KDと90KDで、硫安沈澱と加マグネシウムイオンバッファーで流出させた。DEAEカラムで分離した、血球凝集活性をもつ350KDのタンパクと共通抗原性をもつことから、88KDと90KDのポリペプタイドの4量体であると推定される。この他ニクバエの休眠蛹と非休眠蛹を誘導する条件で飼育した幼虫のエクジソン代謝を調べ、その違いを指摘した。, Effects of ecdysone and jevenile hormone on the synthesis of lectin-like protein, ecdysone receptor protein and prothoracicotropic hormone were studied in larvae and pupae of Bombyx silkworm. The lectin-like protein appeared in hemolymph just before 4th ecdysis and soon after the gut purge in the 5th instar. Change of titer of this protein is almost parallel to the change of ecdysone titer. This protein is of a strong hemagglutinin activity. Using this reaction, the protein was isolated and identified. Molecular weight is about 350KD, and it is thought as a tetramer of 88KD and 90KD polypeptide. Sugers, particularly, glucronic acid, inhibit hemagglutinin activity. Ecdysone receptor protein was isolated from the imaginal wing discs of Bombyx silkworm. Using radioactive Ponasterone A, binding coefficeient to ecdysteroid was determined as 4.1 or 4.3 nM. Molecular weight of the receptor protein was 2.7KD and 6.0KD. To fishing out of the receptor gene from genomic library of the silkworm, a common DNA binding domain of steroid hormones were selected and 15 sequences of common DNA sequence was synthesized. Change of amount of this protein in imaginal discs was studied through 5th instar larve. However, in terms of binding activity/g total protein was almost constant with some fluctiation. Change of ecdysone titer and development of imaginal discs were studied diapuse- and nondiapause-destined culture of the flesh fly. In diapause-destined larvae and prepupae, ecdysone content increased just after pupariation and then decreased to almost undetectable level before pupation. However, in nondiapause-destined larvae second increase of ecdysone content was observed several hours before pupation. Pupal development of imaginal discs was earlier in nondeapause-destined animals than deapause-destined ones, although pupation time was almost same between them., 研究課題/領域番号:62540541, 研究期間(年度):1987 – 1988, 出典:研究課題「変態時の特定タンパク合成に対するエクジソンとJHの作用」課題番号62540541 (KAKEN:科学研究費助成事業データベース(国立情報学研究所)) (https://kaken.nii.ac.jp/ja/report/KAKENHI-PROJECT-62540541/625405411988kenkyu_seika_hokoku_gaiyo/)を加工して作成, 金沢大学理学部}, title = {変態時の特定タンパク合成に対するエクジソンとJHの作用}, year = {1990} }