レンチウイルスベクターを産生する時の培養条件の違いにより、ウイルス粒子の小脳プルキンエ細胞に対する親和性が異なることを明らかにした。すなわち、ウイルス回収時の培養液のpHが7.2以上であるとプルキンエ細胞に対する親和性が高く、pH7.0以下だとバーグマングリアに対する親和性が高まる。
プルキンエ細胞のGluR2 Ser880がリン酸化しないマウスの作出
以下の2種類のトランスジェニックマウスをかけ合わせて得る。(1)L7プロモーター制御下で、プルキンエ細胞特異的にリバーステトラサイクリントランスアクチベーター(rtTA)を発現するマウス。(2)tetracycline responsive element(TRE)融合最小CMVプロモーターの下流に、GluR2 K882AおよびIRES-GFPを配置した遺伝子を持つトランスジェニックマウス。TRE-最小CMVプロモーター-GluR2 K882Aマウスは4ライン、コントロールとなるTRE-最小CMVプロモーター-GluR2(野生型)マウスは3ライン得ることができた。現在、得られたトランスジェニックマウスを繁殖させて数を増やしているところである。L7-rtTAマウスに関しては、6ラインを得ることができた。このうち2ラインはプルキンエ細胞に選択的にrtTAを発現していること、その2ラインのマウス小脳にTRE-最小CMVプロモーター-GFPを搭載したレンチウイルスベクターを接種し、ドキシサイクリンを与えることでプルキンエ細胞に限局してGFPを発現することを確認した。現在、TRE-最小CMVプロモーター-GluR2 K882Aマウス(4ライン)とTRE-最小CMVプロモーター-GluR2(野生型)マウス(3ライン)が増えてきたので、L7-rtTAマウスとかけ合わせている。
Tropism of lentiviral vectors for Purkinje cells of a mouse in vivo is influenced by cultivating condition of HEK293T cells, host cells for viral production. The tropism for Purkinje cells is high when the pH of the culture medium is >7.2, whereas the lentiviral vectors produced in the medium with the pH of <7.0 has high tropism for Bergmann glia.
We aimed to produce gene-modified mice in which phosphorylation of GluR2 Ser880 is impaired specifically in Purkinje cells. This is attained by crossing 2 different transgenic mice; A mouse expressing L7-rtTA and that express GluR2 K882A under the control of tetracycline-responsive (TRE) promoter. Expression of rtTA in the former mouse is driven by Purkinje-cell-specific L7 promoter. The transgenic mouse having both transgenes expresses GluR2 K882A only when doxycycline is administered through water and food. We obtained 6 lines of mice with L7-rtTA transgene, in which only 2 lines showed rtTA expression in Purkinje cells. While 4 lines of mice with TRE promoter-GluR2 K882 and 3 lines of mice with TRE promoter-wild-type GluR2 were obtained. Now we are increasing the number of those mice for crossing them with L7-rtTA mice.
グルタミン酸受容体の-アミノ酸残基のリン酸化と運動学習のリンクを証明する試み
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ME-PR-HIRAI-H-kaken 2008-2p.pdf
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